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微生物檢查培養基的滅菌方法

來源: 發布時間:2020-01-09

滅(mie)菌(jun)(jun)是指用(yong)物理(li)(li)或化學的(de)方(fang)法,殺死(si)物體(ti)表(biao)面(mian)和(he)孔隙(xi)內的(de)一切微生(sheng)物或生(sheng)物體(ti),即把所有生(sheng)命的(de)物質全部殺死(si)。常用(yong)的(de)滅(mie)菌(jun)(jun)方(fang)法可分為(wei)物理(li)(li)的(de)和(he)化學的(de)兩類:物理(li)(li)方(fang)法如干熱(烘燒和(he)灼燒)、濕熱(常壓或高壓蒸煮(zhu))、射線(xian)處理(li)(li)(超聲波(bo)、微波(bo))、過濾、清洗和(he)大(da)量無菌(jun)(jun)水沖洗等措施(shi)。化學方(fang)法是使(shi)用(yong)甲醛、過氧化氫(qing)、高錳酸鉀、次(ci)氯(lv)酸鈉、抗(kang)菌(jun)(jun)素、酒精化學藥品處理(li)(li)等。

微生物(wu)檢查培養基常用的滅菌(jun)(jun)方法主要是濕熱滅菌(jun)(jun)和過(guo)濾除(chu)菌(jun)(jun)。

1、濕(shi)熱滅菌:

蒸(zheng)汽(qi)(qi)(qi)在(zai)(zai)冷凝時釋放出大量潛能,并且蒸(zheng)汽(qi)(qi)(qi)具(ju)有(you)強大穿透力,蒸(zheng)汽(qi)(qi)(qi)的濕(shi)(shi)熱(re)破(po)壞菌體(ti)蛋(dan)白質和(he)核酸的化學(xue)鍵,使酶失活,微生(sheng)(sheng)(sheng)物因(yin)代謝障礙而死(si)(si)(si)亡。濕(shi)(shi)熱(re)滅(mie)菌的效果,取決于致(zhi)死(si)(si)(si)溫(wen)度(du)和(he)致(zhi)死(si)(si)(si)時間。致(zhi)死(si)(si)(si)溫(wen)度(du)是(shi)殺滅(mie)微生(sheng)(sheng)(sheng)物的極限溫(wen)度(du)。致(zhi)死(si)(si)(si)時間是(shi)在(zai)(zai)致(zhi)死(si)(si)(si)溫(wen)度(du)下(xia)殺滅(mie)全部微生(sheng)(sheng)(sheng)物所需(xu)時間。

高壓蒸汽(qi)滅(mie)菌(jun)適合(he)于耐高溫培養基、接種(zhong)器械(xie)和(he)蒸餾(liu)水(shui)的滅(mie)菌(jun)。培養基分(fen)裝后應(ying)(ying)立(li)即滅(mie)菌(jun),應(ying)(ying)在(zai)(zai)當(dang)天(tian)內完成滅(mie)菌(jun)工(gong)作,不(bu)(bu)可過(guo)(guo)夜(ye)。消毒時間(jian)不(bu)(bu)宜過(guo)(guo)長,也(ye)不(bu)(bu)能超過(guo)(guo)規(gui)定的壓力范圍,否則有機(ji)物質(zhi)就會(hui)(hui)在(zai)(zai)高溫下分(fen)解,失去營養作用,也(ye)會(hui)(hui)使(shi)培養基變質(zhi)、變色,甚(shen)至難以(yi)凝固。

培養基配(pei)制后,應按驗證過的高壓滅菌(jun)程(cheng)序滅菌(jun)。2015版(ban)《中國藥典》第三次公(gong)示稿,1106 非無(wu)菌(jun)產品微(wei)生物限度檢(jian)查:控制菌(jun)檢(jian)查法中,列(lie)出部(bu)分培養基的滅菌(jun)條件,如下表所示:

培養基(ji)名稱(cheng)

滅菌條件

腸道(dao)菌增菌液(ye)體(ti)培養基

加熱至100℃ 30分鐘,立即冷卻

紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂(zhi)培養(yang)基

加熱(re)煮沸(fei)(不能在高壓滅菌(jun)器中加熱(re))

RV 沙門菌增菌液體培養(yang)基

滅菌溫度不能超(chao)過115℃

木糖(tang)賴氨酸脫氧(yang)膽酸鹽瓊脂培(pei)養(yang)基

加(jia)熱至沸騰(不能在高壓滅菌器中加(jia)熱)

其他未(wei)明確標示滅(mie)(mie)菌方法的培(pei)養基,按供(gong)應商(shang)標簽所示滅(mie)(mie)菌方法滅(mie)(mie)菌或按驗證過的高壓滅(mie)(mie)菌程序滅(mie)(mie)菌。

2、過濾除菌:

一(yi)些抗(kang)生(sheng)素及有機物等,遇熱容易分解(jie),不能與(yu)培(pei)養(yang)(yang)基(ji)一(yi)起進行高(gao)溫滅菌,而要使(shi)用(yong)細菌過(guo)濾器濾去其(qi)中的(de)(de)雜菌,例如含(han)抗(kang)生(sheng)素的(de)(de)沙氏葡萄糖瓊(qiong)脂(zhi)培(pei)養(yang)(yang)基(ji)。過(guo)濾后的(de)(de)溶液要立即加入(ru)培(pei)養(yang)(yang)基(ji)中,若(ruo)(ruo)為液體培(pei)養(yang)(yang)基(ji),可(ke)在培(pei)養(yang)(yang)基(ji)冷(leng)卻至30℃時加入(ru);若(ruo)(ruo)為固體培(pei)養(yang)(yang)基(ji),必須在培(pei)養(yang)(yang)基(ji)凝固之前(50-60℃)加入(ru),振蕩使(shi)溶液與(yu)其(qi)他成分混合均勻。

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