培養基的滅菌及使用

1.每(mei)次配置時，要(yao)注意其生(sheng)產日(ri)期是否(fou)在保質期內，查看其開(kai)瓶日(ri)期及瓶口密封性，保證(zheng)其未變(bian)質，并且未吸(xi)潮。
2.培養基配(pei)置時(shi)，稱量要準確，包括鹽水的分裝(zhuang)要準確。
3.一定要保證(zheng)現配制現滅菌，未滅菌的配好培養(yang)基(ji)不(bu)(bu)能(neng)長時(shi)間(jian)放置，更不(bu)(bu)可隔夜。
4.滅菌(jun)時(shi)要保(bao)證(zheng)恒溫、恒壓，同時(shi)要保(bao)證(zheng)有效滅菌(jun)時(shi)間。
5.滅菌過的(de)培養基(ji)要冰(bing)箱保存，可保存一周，一般不(bu)超過 3 天。而且要遵循“先入(ru)先出”原則(ze)，先配制(zhi)的(de)要先使用。
6.在(zai)使用(yong)時(shi)，要根據當班次的使用(yong)量，用(yong)水(shui)(shui)(shui)浴鍋(guo)先(xian)將培(pei)養(yang)基溶化為液態(tai)，然(ran)后及時(shi)調(diao)低水(shui)(shui)(shui)域(yu)溫(wen)度（先(xian)化好的可從水(shui)(shui)(shui)域(yu)取出，放在(zai)水(shui)(shui)(shui)浴鍋(guo)鍋(guo)蓋上）待用(yong)，千萬不可長時(shi)間使培(pei)養(yang)基處于高溫(wen)狀(zhuang)態(tai)。
7.做產品微生物檢測時，傾倒培養基(ji)(ji)溫度在(zai) 45℃左右(you)，不可過燙，避(bi)免將(jiang)菌燙死；也不可過涼，化好的培養基(ji)(ji)又結塊凝固，不便于觀察結果。
8.每瓶(ping)培養(yang)基均要做空白(bai)。
9.盡(jin)量集中做樣(yang)，避免頻繁打(da)開(kai)同一(yi)瓶培(pei)養(yang)基瓶塞(sai)，增大培(pei)養(yang)基的污(wu)染幾(ji)率，出現誤差(cha)結果(guo)。
10.培(pei)養(yang)基剩余過少時，可先(xian)將其傾(qing)倒成空(kong)白(bai)用板。

做樣環境(jing)的(de)維持

一、大環境（房間）
1.做(zuo)樣時(shi)，窗(chuang)戶(hu)和空(kong)調要關閉，或(huo)用酒精(jing)對(dui)房(fang)間進(jin)行噴(pen)霧消(xiao)毒，避免房(fang)間內空(kong)氣流通影(ying)響超凈臺(tai)內部環境（在有通排風系統的恒溫恒濕無(wu)菌(jun)間進(jin)行操作）。
2.如果在原來的原料微生物檢測室進行做(zuo)樣，要定期開啟紫外(wai)燈，對房(fang)間進行殺(sha)菌。
二、小環境（超凈臺）
1.定期清潔初(chu)效過(guo)濾(lv)器，要(yao)及時更換。
2.做樣前(qian)，將超(chao)凈(jing)臺(tai)內(nei)部進(jin)行清(qing)潔，用 75%酒精進(jin)行擦拭(shi)消毒，并(bing)提前(qian)半小時將超(chao)凈(jing)臺(tai)紫外(wai)燈打開，對(dui)超(chao)凈(jing)臺(tai)內(nei)部環境進(jin)行殺菌。
3.關紫外燈，開風(feng)機(ji)，調整合適進風(feng)量，風(feng)量不可(ke)過低。
4.每次(ci)做(zuo)樣后，要對超凈臺內(nei)部進行清理、清潔，并用 75%酒(jiu)精(jing)進行擦拭消毒。
5.紫外燈(deng)根據(ju)其使(shi)用壽命(ming)要及時更換。
6.做樣同(tong)時，要做上(shang)相應菌(jun)落檢(jian)測的環境空白。
7.做樣區(qu)域的選擇：
①一般在距離超(chao)凈臺外沿的 1/3-2/3 區域(yu)進行無(wu)菌操作(zuo)；
②要在酒精燈火焰的(de)外焰保(bao)護區域(yu)進行操(cao)作。

 工器具的潔凈度

1.玻璃器皿：采用干熱滅菌方式進行(xing)滅菌。

2.做(zuo)(zuo)樣(yang)用(yong)剪刀、勺子等物品要做(zuo)(zuo)到做(zuo)(zuo)樣(yang)專用(yong)，不可(ke)與其它(ta)操作器具(ju)混用(yong)，使用(yong)時，先用(yong)75%酒精消毒，再采(cai)用(yong)灼燒方式進(jin)行滅菌(jun)。

3.接種針（環）采用灼燒方式進行滅菌，但要注意做樣時要先將接種針（環）進行冷卻。

樣品的采(cai)集及檢測

一、保證采樣器具的無菌性
1.玻璃器皿：采用干熱滅菌方式進行滅菌，保證恒溫、時間足夠（但不可時間過長，導致玻璃器皿易裂紋而報廢）。
2.取樣筐：使用前要用 75%酒精進行噴灑消毒
3.取樣勺、濃奶取樣提子：要保證其清潔消毒，清潔后用 75%酒精進行擦拭消毒。
4.取樣袋：可現用酒精進行擦拭消毒，再在超凈臺用紫外燈照射消毒，（包裝車間要在傳遞窗用紫外燈照射消毒）。
5.電子稱表面用 75%酒精消毒。

二、人員操作
1.保證手部的清洗、消毒：取樣前及做樣前都要先洗手再消毒。
2.取樣要具有代表性（隨機樣、目的樣、綜合樣）且要標示清楚。
3.取樣完畢，不可在車間逗留，要及時將樣品放入超凈臺，對其外表面進行紫外燈照射消毒。
4.在要求的做樣區域進行操作。
5.做樣前，要用 75%酒精棉球對樣品袋口部進行擦拭消毒，再開口。
6.往鹽水瓶加樣品時，要注意勺子或袋子盡量不接觸瓶口。
7.樣品計量要準確，稀釋倍數也要準確（1mL 吸管不允許將管口敲掉），進行 100 倍稀釋時，1mL 吸管要伸入鹽水中，不可以將樣品管壁流下去，同時要避免將管底部捅破。
8.鹽水溫度以 40℃左右為宜，不能過熱，將部分微生物燙死，也不能溫度太低，不能將奶粉溶解完全。
9.進行稀釋時，要搖勻，保證溶液的均一性。
10.傾倒平皿時，要注意培養基瓶口不要接觸到平皿；傾倒的培養基要適量，不可以太少，在培養過程中干掉，微生物亦死亡，以 15mL 左右為宜。
11.做大腸菌群樣時，要提前將乳糖膽鹽培養基培養管按需要量備好，放入超凈臺對外表面進行紫外線滅菌。
12.接二步時，要注意先將接種針（環）進行冷卻，避免出現接不上菌落的情況發生，導致無法判斷、確認。
13.做(zuo)樣完畢(bi)，及時放入相(xiang)應培(pei)養(yang)箱進(jin)行培(pei)養(yang)，并清理清潔(jie)超凈臺。