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微生物無菌室應該用什么方式滅菌?

來源(yuan): 發(fa)布時間(jian):2023-09-11

首先我(wo)們(men)應(ying)該了解我(wo)們(men)的無菌(jun)室應(ying)該處于什么狀態,有什么要(yao)求。一(yi)般情況下,我(wo)們(men)的無菌室達(da)到空間潔凈(jing)(jing)度10000級(ji)(ji)就可以了(le),但操作區域例如超凈(jing)(jing)工作臺(tai)、生物安全(quan)柜里(li)需要達(da)到潔凈(jing)(jing)度100級(ji)(ji),也就是我(wo)們(men)常說的“整體萬級(ji)(ji),局(ju)部百級(ji)(ji)”。萬級潔凈度對空間落菌的要求是:靜態檢測,自然沉降菌≤3CFU/皿,百級潔凈度對空間落菌的要求是:靜態檢測,自然沉降菌≤1CFU/皿。也就是說平時我們做的空間驗證,只要不超過這個標準,就是符合要求的,因此也不必太過擔憂。

 

那(nei)么,怎樣能夠保證我(wo)們的無(wu)菌室符合要(yao)求?當(dang)我(wo)們的無(wu)菌室出現(xian)異常應該如何處(chu)理?

 

我們得先從(cong)無菌室(shi)的滅菌方式開始講。一般無菌室的滅菌方式分為:紫外線照射、臭氧(yang)滅菌、化學熏蒸這幾種。這(zhe)幾種(zhong)滅菌(jun)方式(shi)各自有各自的特點(dian),大家可(ke)以根(gen)據(ju)自己(ji)的實際情況(kuang)來選擇合適的滅菌(jun)方式(shi),遇到異常難以解決時,也可(ke)以考慮增加一種(zhong)滅菌(jun)方式(shi)來解決。

 

紫外線照射:紫外線滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)是(shi)利用(yong)適當波長的紫外線破(po)壞(huai)微(wei)生物(wu)機體細(xi)胞(bao)中的DNA或RNA結(jie)構,造成生長性細(xi)胞(bao)死亡來達(da)到滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)效果,屬于一種物(wu)理方(fang)式(shi)的滅(mie)(mie)菌(jun)(jun),也(ye)是(shi)我們微(wei)生物(wu)檢測(ce)無菌(jun)(jun)室最(zui)常用(yong)的滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)方(fang)式(shi)。該方(fang)法(fa)操作簡(jian)單,使用(yong)方(fang)便,也(ye)比較經(jing)濟,可以殺滅(mie)(mie)各種微生物,包括細菌、病毒、真菌、立克次體以及支原體等,因(yin)此在實(shi)驗室里,是最常見的滅菌方式。

 

但紫外(wai)(wai)線滅(mie)菌(jun)(jun)也(ye)有一定的(de)(de)(de)缺點,紫外(wai)(wai)線只能(neng)對(dui)直接照射到(dao)(dao)(dao)的(de)(de)(de)微生物(wu)起(qi)到(dao)(dao)(dao)殺滅(mie)作(zuo)用(yong)(yong),因此(ci)只能(neng)對(dui)空間中照射到(dao)(dao)(dao)的(de)(de)(de)地方起(qi)作(zuo)用(yong)(yong),一些照射不到(dao)(dao)(dao)的(de)(de)(de)死角(jiao)或者(zhe)物(wu)品的(de)(de)(de)內部是無(wu)法達到(dao)(dao)(dao)效果的(de)(de)(de),因此(ci)使用(yong)(yong)紫外(wai)(wai)線滅(mie)菌(jun)(jun)的(de)(de)(de)無(wu)菌(jun)(jun)室,也(ye)會輔(fu)助以一些化學試劑,例如(ru)潔(jie)爾滅(mie)、酒精等消毒劑對死角進行清理。使用紫(zi)外(wai)線(xian)滅菌,應當定期檢測紫(zi)外(wai)線(xian)的(de)(de)強(qiang)(qiang)度(du),若是無法達(da)到要求的(de)(de)強(qiang)(qiang)度(du),就(jiu)應該(gai)考(kao)慮更(geng)換紫(zi)外(wai)燈。根據2002年國(guo)家衛生部發(fa)布的(de)(de)《消毒技術規范》,紫(zi)外(wai)燈的(de)(de)要求是紫(zi)外(wai)線(xian)強(qiang)(qiang)度(du)不得低于70μW/cm2(紫外燈1m處),而空間內的紫外燈的布局也是有要求的,要求平均每m3不少于1.5W。也就是說,假如你無菌室是5m2,實驗室高度是3米,那么你的空間體積就是15m3,你空間中使用的紫外燈的功率就不得低于22.5w。按照這個方式就可以算一下你的無菌室需要多少紫外燈了。當紫外線的強度達不到要求時,就需要更換紫外燈了。

 

臭氧滅菌:臭(chou)氧是一(yi)種強氧化劑,滅菌過程(cheng)屬生物化學氧化反應。

O3滅菌原理(li)一般有以下(xia)三種:

1.臭氧(yang)通(tong)過氧(yang)化(hua)分解細菌內部葡萄糖所需的酶,使細菌滅活死亡。

2.直接與細(xi)菌、病(bing)毒作(zuo)用,破(po)壞它們的細(xi)胞(bao)器和DNA、RNA,使(shi)細(xi)菌的新陳(chen)代謝受到破(po)壞,導致(zhi)細(xi)菌死亡。

3.透過細胞(bao)(bao)膜組織,侵(qin)入細胞(bao)(bao)內(nei),作用(yong)于膜內(nei)的(de)脂(zhi)蛋白和內(nei)部的(de)脂(zhi)多糖(tang),改變(bian)細胞(bao)(bao)的(de)通透性,導(dao)致細胞(bao)(bao)溶解(jie)死亡(wang)。

 

使(shi)用(yong)臭氧滅菌(jun),殺(sha)菌(jun)徹底,無(wu)殘留(liu),殺(sha)菌(jun)廣譜,可(ke)殺(sha)滅細菌(jun)繁殖體和(he)芽孢、病(bing)毒、真菌(jun)等,并可(ke)破壞肉毒桿菌(jun)毒素。另外,O3對霉菌也有極強的殺滅作用。O3為氣體,能迅速彌漫到整個滅菌空間,滅菌無死角。所以,臭氧滅菌也是目前被廣泛使用的滅菌方式。用臭氧消毒空氣,必須是在封閉空間,且室內無人條件下進行,消毒后至少過 30min 才能進入。另外臭氧的密度比空氣大,在空氣中會迅速下降到空間的底層,因此臭氧發生器也應當安裝在無菌室的頂部。一般滅菌時間選擇30min即可,要求空間中臭氧濃度不低于20mg/m3

 

化(hua)學(xue)熏蒸(zheng):化(hua)學(xue)熏蒸是一種十分(fen)傳統的空(kong)間(jian)滅菌(jun)方式,一般是采(cai)用易揮(hui)發氣化(hua)的化(hua)學(xue)物(wu)質的蒸汽對空(kong)間(jian)微生物(wu)進行殺滅的目的,一般常用甲醛、戊二醛、過氧化氫、過氧乙酸等

 

這里以常用(yong)的甲醛熏蒸為例。一般(ban)(ban)甲(jia)醛(quan)(quan)熏(xun)蒸(zheng)又(you)稱甲(jia)醛(quan)(quan)高錳酸鉀(jia)熏(xun)蒸(zheng),將40%的甲(jia)醛(quan)(quan)溶液加(jia)入到高錳酸鉀(jia)溶液中,二者(zhe)發生反應,放出大量的熱使甲(jia)醛(quan)(quan)蒸(zheng)發到空間中,從而對無(wu)菌(jun)(jun)(jun)(jun)室(shi)進行滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)(jun)(jun)。一般(ban)(ban)甲(jia)醛(quan)(quan)熏(xun)蒸(zheng)的滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)(jun)(jun)效果比(bi)較理想,對霉菌(jun)(jun)(jun)(jun)等較難(nan)清除的污染菌(jun)(jun)(jun)(jun)也有較好的殺滅(mie)(mie)效果,因此(ci)在無(wu)菌(jun)(jun)(jun)(jun)室(shi)被霉菌(jun)(jun)(jun)(jun)污染時(shi),通常(chang)都是使用(yong)甲(jia)醛(quan)(quan)進行熏(xun)蒸(zheng)來徹底消滅(mie)(mie)污染源。

 

但是(shi)甲(jia)醛(quan)熏蒸的缺點(dian)也(ye)是(shi)很明顯的,因為甲(jia)醛(quan)是(shi)一種強(qiang)致癌性的化學品(pin),對人(ren)體的傷害較大,在使(shi)用過程中需要特(te)別注意,并且殘留量也(ye)要進行嚴(yan)格的控制。每次熏蒸后,至少需要通風24h才可以(yi)使(shi)用。

 

目前對熏蒸后甲醛的殘留量并沒有明確要求,還是要通過經驗來判斷,目前國家對居民住房要求甲醛含量不大于0.1mg/m3,所以我們也可使用甲醛含量測定儀來對熏蒸后的空間進行檢測。目前甲醛熏蒸滅菌的方法食品檢測無菌室的滅菌中已經較少使用,主要也是因為操作比較繁瑣,滅菌時間較長,進行一次甲醛熏蒸之后,會有幾天無法使用無菌室進行檢測,所以只有在其他滅菌方法無法達到理想的滅菌效果時,才會考慮進行甲醛熏蒸。

 

而其實這(zhe)種(zhong)滅菌(jun)方式目前(qian)在很多藥企的(de)無菌(jun)室滅菌(jun),還是(shi)會經常用到(dao)的(de),另外,有些生產區域如果(guo)長(chang)期被霉(mei)菌(jun)污染,也會考(kao)慮用甲醛(quan)熏蒸的(de)方法來解決(jue)。

 

了解了這(zhe)幾種(zhong)(zhong)常用的(de)無(wu)菌(jun)室滅(mie)(mie)(mie)菌(jun)方(fang)(fang)(fang)式(shi),在我們(men)日常的(de)工(gong)作中也可(ke)以根據自己(ji)實(shi)驗室情況(kuang)進行選擇,尤其是長期使用一(yi)種(zhong)(zhong)滅(mie)(mie)(mie)菌(jun)方(fang)(fang)(fang)式(shi)若(ruo)是滅(mie)(mie)(mie)菌(jun)效果(guo)達(da)不(bu)到理想的(de)效果(guo)時,可(ke)以根據實(shi)際情況(kuang)更換滅(mie)(mie)(mie)菌(jun)方(fang)(fang)(fang)式(shi),或者引進一(yi)種(zhong)(zhong)新的(de)滅(mie)(mie)(mie)菌(jun)方(fang)(fang)(fang)式(shi)兩者結(jie)合,以期達(da)到預(yu)想的(de)效果(guo)。

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