首先我們(men)應該了解(jie)我們(men)的無菌室應該處(chu)于(yu)什(shen)么狀(zhuang)態，有什(shen)么要求。一般情況下，我(wo)們的(de)無菌室達到空間潔(jie)凈度(du)10000級(ji)(ji)就可(ke)以了，但(dan)操作(zuo)區域例(li)如超凈工作(zuo)臺(tai)、生(sheng)物安全柜里需要達到潔(jie)凈度(du)100級(ji)(ji)，也就是我(wo)們常說(shuo)的(de)“整體萬級(ji)(ji)，局部(bu)百級(ji)(ji)”。萬級潔凈度對空間落菌的要求是：靜態檢測，自然沉降菌(jun)≤3CFU/皿，百級潔凈度對空間落菌的要求是：靜態檢測，自然沉降菌≤1CFU/皿。也就是說平時我們做的空間驗證，只要不超過這個標準，就是符合要求的，因此也不必太過擔憂。

那么，怎(zen)樣能夠保證我們(men)的(de)(de)無菌(jun)室(shi)符合要求？當我們(men)的(de)(de)無菌(jun)室(shi)出(chu)現異常(chang)應該如(ru)何處理？

我們得先從無菌室的滅菌方式(shi)開(kai)始講(jiang)。一般無菌室的滅菌方式分為：紫外線照射、臭氧滅菌(jun)、化學熏蒸這幾種。這(zhe)幾種(zhong)滅菌方(fang)式(shi)各自(zi)有(you)各自(zi)的(de)特點，大家可以根據自(zi)己的(de)實(shi)際(ji)情況來選擇合適(shi)的(de)滅菌方(fang)式(shi)，遇(yu)到(dao)異(yi)常難以解(jie)決(jue)時(shi)，也可以考(kao)慮(lv)增加一種(zhong)滅菌方(fang)式(shi)來解(jie)決(jue)。

紫(zi)外(wai)線照(zhao)射(she)：紫外線(xian)滅菌(jun)(jun)是利用(yong)適當(dang)波長的紫外線(xian)破壞微(wei)生物(wu)機體(ti)細(xi)胞(bao)(bao)中的DNA或RNA結構，造成生長性細(xi)胞(bao)(bao)死亡來達到(dao)滅菌(jun)(jun)效果，屬(shu)于一(yi)種物(wu)理方式的滅菌(jun)(jun)，也(ye)是我(wo)們微(wei)生物(wu)檢測(ce)無菌(jun)(jun)室最常用(yong)的滅菌(jun)(jun)方式。該方法操作(zuo)簡(jian)單，使用(yong)方便，也(ye)比較經濟，可以(yi)殺滅各種微生物，包括細菌、病毒、真菌、立克次體以及支原體等，因(yin)此在實驗室里，是最常見的滅菌(jun)方式。

但紫(zi)外(wai)線(xian)滅(mie)菌也(ye)有一定的(de)缺(que)點，紫(zi)外(wai)線(xian)只能對(dui)(dui)直接照(zhao)射到(dao)的(de)微生物起(qi)到(dao)殺滅(mie)作用(yong)，因此只能對(dui)(dui)空間(jian)中照(zhao)射到(dao)的(de)地方起(qi)作用(yong)，一些照(zhao)射不到(dao)的(de)死角或者物品的(de)內部是無法達到(dao)效果的(de)，因此使(shi)用(yong)紫(zi)外(wai)線(xian)滅(mie)菌的(de)無菌室，也(ye)會輔(fu)助以一些化學試劑，例如(ru)潔爾滅、酒精等消毒(du)劑對死角(jiao)進行清理。使用紫(zi)外(wai)線滅菌，應當(dang)定期檢測紫(zi)外(wai)線的強度(du)，若是無法達到要求的強度(du)，就(jiu)應該考慮更換(huan)紫(zi)外(wai)燈。根據2002年國家(jia)衛(wei)生部(bu)發布的《消毒(du)技術規范》，紫(zi)外(wai)燈的要求是紫(zi)外(wai)線強度(du)不得低于70μW/cm²（紫外燈1m處），而空間內的紫外燈的布局也是有要求的，要求平均每m³不少于1.5W。也就是說，假如你無菌室是5m²，實驗室高度是3米，那么你的空間體積就是15m³，你空間中使用的紫外燈的功率就不得低于22.5w。按照這個方式就可以算一下你的無菌室需要多少紫外燈了。當紫外線的強度達不到要求時，就需要更換紫外燈了。

臭(chou)氧滅菌：臭氧(yang)是一(yi)種強氧(yang)化(hua)(hua)劑，滅菌(jun)過程屬生物化(hua)(hua)學氧(yang)化(hua)(hua)反應。

O₃滅菌原理一般有以(yi)下三(san)種：

1.臭(chou)氧通(tong)過氧化分(fen)解細菌內部葡萄糖所(suo)需(xu)的酶，使(shi)細菌滅活死亡(wang)。

2.直接與細(xi)菌、病毒(du)作(zuo)用，破(po)(po)壞它們(men)的(de)細(xi)胞(bao)器和DNA、RNA，使(shi)細(xi)菌的(de)新陳(chen)代謝受到破(po)(po)壞，導致(zhi)細(xi)菌死亡。

3.透過細胞膜組織(zhi)，侵入細胞內，作(zuo)用于(yu)膜內的(de)脂蛋白和(he)內部的(de)脂多糖(tang)，改變細胞的(de)通透性，導致(zhi)細胞溶(rong)解死亡。

使(shi)用臭氧滅菌，殺菌徹(che)底，無殘留，殺菌廣譜(pu)，可殺滅細菌繁殖體和(he)芽孢、病毒(du)、真菌等，并可破壞肉(rou)毒(du)桿(gan)菌毒(du)素。另外，O3對霉菌也有極強的殺滅作用。O3為氣體，能迅速彌漫到整個滅菌空間，滅菌無死角。所以，臭氧滅菌也是目前被廣泛使用的滅菌方式。用臭氧消毒空氣，必須是在封閉空間，且室內無人條件下進行，消毒后至少過 30min 才能進入。另外臭氧的密度比空氣大，在空氣中會迅速下降到空間的底層，因此臭氧發生器也應當安裝在無菌室的頂部。一般滅菌時間選擇30min即可，要求空間中臭氧濃度不低于20mg/m³ 。

化學熏(xun)蒸(zheng)：化學熏蒸是(shi)一種十分傳統的(de)空間(jian)滅(mie)菌(jun)方(fang)式(shi)，一般是(shi)采用(yong)易揮(hui)發氣化的(de)化學物(wu)質的(de)蒸汽(qi)對空間(jian)微生物(wu)進行殺(sha)滅(mie)的(de)目的(de)，一般常用(yong)甲醛、戊二醛、過氧化氫、過氧乙酸等。

這里以常用的甲醛熏蒸為(wei)例。一般(ban)甲(jia)(jia)(jia)醛熏(xun)蒸(zheng)又(you)稱(cheng)甲(jia)(jia)(jia)醛高錳酸鉀熏(xun)蒸(zheng)，將(jiang)40%的(de)甲(jia)(jia)(jia)醛溶液加(jia)入到高錳酸鉀溶液中，二者發生(sheng)反應(ying)，放出大量的(de)熱使甲(jia)(jia)(jia)醛蒸(zheng)發到空間中，從而對無菌(jun)(jun)室進行(xing)(xing)滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)。一般(ban)甲(jia)(jia)(jia)醛熏(xun)蒸(zheng)的(de)滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)效果比較理想，對霉菌(jun)(jun)等較難(nan)清除的(de)污(wu)染(ran)菌(jun)(jun)也有(you)較好的(de)殺(sha)滅(mie)(mie)效果，因(yin)此在無菌(jun)(jun)室被(bei)霉菌(jun)(jun)污(wu)染(ran)時，通(tong)常都是(shi)使用(yong)甲(jia)(jia)(jia)醛進行(xing)(xing)熏(xun)蒸(zheng)來(lai)徹底(di)消滅(mie)(mie)污(wu)染(ran)源。

但是(shi)甲(jia)醛熏(xun)蒸的缺點(dian)也是(shi)很明顯的，因為甲(jia)醛是(shi)一種(zhong)強致癌性(xing)的化學品，對(dui)人體(ti)的傷害較大，在使用過程(cheng)中(zhong)需要(yao)特別注(zhu)意，并且殘留量(liang)也要(yao)進行嚴格的控制。每次熏(xun)蒸后，至少(shao)需要(yao)通風24h才可以(yi)使用。

目前對熏蒸后甲醛的殘留量并沒有明確要求，還是要通過經驗來判斷，目前國家對居民住房要求甲醛含量不大于0.1mg/m³，所以我們也可使用甲醛含量測定儀來對熏蒸后的空間進行檢測。目前甲醛熏蒸滅菌的方法食品檢測無菌室的滅菌中已經較少使用，主要也是因為操作比較繁瑣，滅菌時間較長，進行一次甲醛熏蒸之后，會有幾天無法使用無菌室進行檢測，所以只有在其他滅菌方法無法達到理想的滅菌效果時，才會考慮進行甲醛熏蒸。

而其實這種滅菌方式目(mu)前在很多藥企的(de)無菌室滅菌，還是會經常用到的(de)，另(ling)外，有些生產(chan)區(qu)域如果長期被霉菌污染，也(ye)會考(kao)慮用甲醛(quan)熏蒸的(de)方法來(lai)解決。

了解了這(zhe)幾種常(chang)用的(de)(de)無菌(jun)(jun)(jun)室(shi)滅(mie)菌(jun)(jun)(jun)方(fang)式(shi)，在(zai)我們日常(chang)的(de)(de)工作中也可(ke)以根(gen)據自己實驗室(shi)情況進行選擇(ze)，尤其是長期使用一種滅(mie)菌(jun)(jun)(jun)方(fang)式(shi)若是滅(mie)菌(jun)(jun)(jun)效(xiao)果達(da)不(bu)到理想的(de)(de)效(xiao)果時，可(ke)以根(gen)據實際(ji)情況更換滅(mie)菌(jun)(jun)(jun)方(fang)式(shi)，或者(zhe)引進一種新的(de)(de)滅(mie)菌(jun)(jun)(jun)方(fang)式(shi)兩者(zhe)結合，以期達(da)到預(yu)想的(de)(de)效(xiao)果。